کیت سنجش پروتئین برادفورد (Bradford Protein Assay Kit) یک روش استاندارد و سریع برای تعیین کمّی پروتئین در نمونه های بیولوژیک است که بر اساس تغییر رنگ معرف Coomassie Brilliant Blue G‑250 در حضور پروتئین عمل می کند. در محیط اسیدی، این رنگ با اسیدهای آمینه جفت می شود و حداکثر جذب در حدود 595 nm ایجاد می کند، به گونه ای که شدت رنگ آبی حاصل مستقیماً با غلظت پروتئین نمونه نسبت دارد. این تکنیک به دلیل سادگی، سرعت بالا و حساسیت مناسب در بسیاری از آزمایشگاه های تحقیقاتی برای اندازه گیری پروتئین در سرم، پلاسما، نمونه های بافتی و کشت سلولی مورد استفاده قرار می گیرد و در مقایسه با روش های پیچیده تر مانند BCA، زمان انجام آزمایش را به طور قابل توجهی کاهش می دهد. کیت های برادفورد معمولاً شامل معرف رنگ، استاندارد پروتئینی (مثلاً Bovine Serum Albumin)، و دستورالعمل دقیق اجرای آزمایش هستند تا نتایج دقیق و قابل اعتماد حاصل شود. این روش برای مثال در دامنه تقریبی 0.026 تا 1.2 mg/mL پروتئین قابل سنجش است که برای بسیاری از نمونه های آزمایشگاهی کافی و کاربردی است.

کاربردهای کیت سنجش پروتئین برادفورد

• کمّی سازی پروتئین کل در نمونه های سرم، پلاسما و هموژنات بافتی
• اندازه گیری پروتئین در نمونه های سلولی و مایعات کشت
• استفاده در تنظیم بار برای الکتروفورز، وسترن بلات و سایر تکنیک های پایین دستی
• ارزیابی بازده استخراج پروتئین در پروتکل های آماده سازی نمونه
• تحقیقات بیوشیمی پروتئین و مطالعات مقایسه ای بین نمونه ها

مشخصات فنی معمول

• روش اندازه گیری: رنگ سنجی (Colorimetric) با جذب در ~595 nm
• اصل تکنیک: اتصال رنگ Coomassie Brilliant Blue G‑250 به پروتئین در محیط اسیدی
• دامنهٔ شناسایی: ~0.026 – 1.2 mg/mL
• نمونه های قابل آزمون: سرم، پلاسما، بافت، سلول و محلول های پروتئینی
• اندازه گیری با: اسپکتروم فتومتر یا دستگاه میکروپلیت خوان
• حساسیت: قابل تشخیص پروتئین در مقادیر کم تا متوسط با سیگنال رنگی قوی
• زمان اجرای آزمایش: معمولاً کمتر از 10–50 دقیقه
• شرایط نگهداری: اغلب در 2–8 °C یا دمای اتاق، بسته به اجزا و دستورالعمل سازنده

پروتکل عملی (نحوه استفاده)

• ۱. آماده کردن استاندارد BSA: یک منحنی استاندارد با غلظت های شناخته شده پروتئین مانند Bovine Serum Albumin تهیه کن تا رابطه جذب‑غلظت مشخص شود.
• ۲. افزودن نمونه و رنگ: به هر چاهک یا لوله حاوی نمونه مقدار مشخصی از نمونه پروتئینی اضافه کن و سپس معرف Bradford را اضافه کن.
• ۳. مخلوط کردن: محتویات را به آرامی مخلوط کن تا رنگ یکنواخت شود.
• ۴. انکوباسیون کوتاه: اجازه بده 5–10 دقیقه در دمای اتاق بماند تا رنگ آبی توسعه یابد.
• ۵. اندازه گیری جذب: جذب را در طول موج ~595 nm با میکروپلیت خوان یا اسپکتروم فتومتر اندازه بگیر.
• ۶. محاسبه غلظت: براساس منحنی استاندارد، غلظت پروتئین نمونه ها را تعیین کن.

مزایا و نکات کلیدی

• ساده و سریع: فقط افزودن رنگ و خواندن جذب برای نتایج کمّی
• نیاز به تجهیزات پیشرفته ندارد — می توان با میکروپلیت خوان و اسپکتروم فتومتر انجام داد
• قابل اجرا روی نمونه های متنوع بیولوژیک
• ایجاد منحنی استاندارد با BSA باعث افزایش دقت و قابلیت تکرار می شود
• محدودیت در حضور برخی عوامل مانند دترجنت های قوی وجود دارد که می توانند اثر رنگ را تغییر دهند — باید در طراحی آزمایش مد نظر قرار گیرد.

نکات کاربردی آزمایشگاهی

• برای داشتن نتایج قابل اعتماد، نمونه ها و استانداردها را در شرایط یکسان بررسی کن.
• اگر نمونه های شما حاوی دترجنت های قوی باشند، ممکن است لازم باشد نمونه را رقیق یا تغییر پروتکل دهی کنی تا اثر تداخل کاهش یابد.
• منحنی استاندارد دقیق با تکرارهای متعدد باعث افزایش دقت اندازه گیری می شود.
• اجزای کیت را دور از نور مستقیم و دمای نامناسب نگهداری کن تا پایداری رنگ حفظ شود.