کیت سنتز cDNA با آنزیم ترانس کریپتاز معکوس (cDNA Synthesis Kit – Reverse Transcriptase) یک ابزار مولکولی استاندارد برای تبدیل RNA به DNA مکمل (Complementary DNA یا cDNA) در نمونه های بیولوژیک حیوانی است. این کیت بر اساس فرایند Reverse Transcription طراحی شده و امکان سنتز دقیق و کارآمد cDNA را از انواع RNA شامل mRNA، total RNA و RNA استخراج شده از بافت ها یا سلول های حیوانات آزمایشگاهی فراهم می کند. در این سیستم، آنزیم Reverse Transcriptase با استفاده از پرایمرهای اختصاصی مانند Oligo(dT)، Random Hexamer یا Gene-Specific Primer رشته RNA را الگو قرار داده و مولکول cDNA با کیفیت بالا تولید می نماید. محصول معمولاً در قالب واکنش های با حجم نهایی 20 µL بهینه سازی شده و قابلیت پشتیبانی از مقادیر RNA در محدوده تقریبی 1 ng تا 5 µg را دارد. کیت های سنتز cDNA از حساسیت و دقت بالایی برخوردار بوده و برای کاربردهای پایین دستی نظیر Real-Time PCR، کلونینگ ژن، بررسی بیان ژن ها، RNA-Seq و تحلیل های علمی ژنتیکی در مدل های حیوانی کاملاً مناسب هستند. وجود بافرهای اختصاصی، مهارکننده RNase، dNTP Mix و کنترل های مثبت در ترکیب کیت باعث افزایش بازده واکنش و تولید داده های موثق می شود. این محصول یکی از اقلام ضروری در آزمایشگاه های تحقیقاتی حیوانی برای مطالعه مسیرهای مولکولی و ارزیابی تغییرات بیان ژن محسوب می گردد.

کاربردهای کیت سنتز cDNA

• تبدیل RNA استخراج شده از بافت ها و سلول های حیوانات آزمایشگاهی به cDNA
• بررسی کمّی بیان ژن ها با استفاده از qPCR و Real-Time PCR
• آماده سازی نمونه برای مطالعات ژنومیکس و ترانسکریپتومیکس حیوانی
• کلونینگ و تکثیر ژن های هدف از الگوی RNA
• استفاده در تحقیقات مرتبط با بیماری ها و پاسخ های فیزیولوژیک در مدل های حیوانی

مشخصات فنی معمول کیت سنتز cDNA

• Reaction volume: 20 µL
• Supported RNA input: 1 ng – 5 µg
• Primer types: Oligo(dT)، Random Hexamer، پرایمر اختصاصی ژن
• Components: Reverse Transcriptase، RT Buffer، dNTP Mix، RNase Inhibitor
• Incubation temperature: معمولاً 42–50 °C (بسته به نوع آنزیم)
• Incubation time: 30 تا 60 دقیقه
• Storage: نگهداری در -20 °C
• Format: مستر میکس آماده یا اجزای تفکیک شده
• Downstream use: سازگار با روش های PCR استاندارد

روش مصرف و نحوه استفاده از کیت سنتز cDNA

مراحل استاندارد نحوه استفاده از کیت سنتز cDNA

• ۱. آماده سازی RNA: RNA استخراج شده از نمونه حیوانی را از نظر کیفیت و خلوص بررسی کرده و به مقدار مناسب واکنش برسان.
• ۲. انتخاب پرایمر: بسته به هدف آزمایش، یکی از پرایمرهای Oligo(dT) یا Random Primer را انتخاب کن.
• ۳. تنظیم واکنش: در یک لوله PCR استریل، RNA، بافر RT، dNTP Mix و آنزیم Reverse Transcriptase را طبق پروتکل کیت مخلوط نما.
• ۴. انکوباسیون: واکنش را در دمای بهینه (معمولاً 42–50 °C) به مدت 30–60 دقیقه انکوبه کن.
• ۵. غیرفعال سازی آنزیم: در پایان، مرحله Heat Inactivation را معمولاً در 70–85 °C به مدت 5 دقیقه انجام بده.
• ۶. استفاده پایین دستی: cDNA سنتزشده را برای مراحل بعدی مانند PCR یا Real-Time PCR به عنوان الگو مورد استفاده قرار بده.
• ۷. نگهداری محصول: cDNA تولیدشده را در -20 °C نگهداری کرده و از چرخه های متعدد انجماد و ذوب خودداری نما.

مزایا و نکات کلیدی کیت سنتز cDNA برای خریداران

• بازده بالا در تبدیل RNA به DNA مکمل
• دقت و حساسیت مناسب برای مطالعات بیان ژن حیوانی
• پشتیبانی از انواع پرایمرها بسته به نیاز پژوهشی
• سازگاری کامل با تکنیک های پایین دستی مانند qPCR
• کاهش خطاهای آزمایشگاهی به دلیل فرمولاسیون بهینه

Scientific Note: سنتز cDNA با استفاده از آنزیم Reverse Transcriptase یکی از مراحل کلیدی در تحلیل بیان ژن ها است. کیت های استاندارد سنتز cDNA امکان تبدیل دقیق RNA نمونه های حیوانی به DNA مکمل پایدار را فراهم کرده و پایه انجام آزمایش های معتبر مولکولی مانند Real-Time PCR در آزمایشگاه های تحقیقاتی حیوانات محسوب می شوند.