Mouse TNF-α ELISA Kit یک کیت استاندارد ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) برای اندازه گیری کمّی سیتوکین التهاب زای Tumor Necrosis Factor alpha (TNF-α) در نمونه های بیولوژیک مختلف از موش است. این کیت ها با استفاده از اصول ساندویچ الایزا طراحی شده اند: پلیت 96 چاله ای از قبل با آنتی بادی اختصاصی TNF-α پوشش داده شده، نمونه ها یا استانداردهای TNF-α به چاله ها افزوده می شوند، سپس یک آنتی بادی دوم بیوتینه شده افزوده می شود و با اتصال به استرپتاویدین-HRP تکمیل می گردد. در نهایت، افزودن سوبسترای TMB باعث تولید رنگ می شود و شدت رنگ در طول موج ≈ 450 nm با میکروپلیت ریدر اندازه گیری می شود که مستقیماً با مقدار TNF-α در نمونه متناسب است — این روش از حساسیت های کم تا چند pg/mL پشتیبانی می کند و امکان سنجش در سرم، پلاسما، سوپرناتانت کشت سلولی و هموژنات بافت را می دهد.

کاربردهای پژوهشی کیت الایزا (ELISA) TNF-α موش

• اندازه گیری کمّی TNF-α در سرم و پلاسما موش ها جهت ارزیابی پاسخ ایمنی و التهاب
• تحلیل سوپرناتانت های کشت سلولی پس از تحریک (مثلاً با LPS) برای بررسی اثر دارو یا مسیرهای التهاب
• اندازه گیری TNF-α در هموژنات های بافتی برای مطالعه پاسخ های بافتی به آسیب یا بیماری
• کاربرد در تحقیقات ایمونولوژی، التهاب، بیماری های سیستمیک و مدل های التهابی

مشخصات فنی معمول کیت الایزا (ELISA) TNF-α موش

• Assay type: Sandwich ELISA
• Detection method: رنگ سنجی با سوبسترای TMB و خواندن در 450 nm
• Sensitivity: حدود ≤ 5 pg/mL (بسته به برند و نوع kit)
• Detection range: ~7–2000 pg/mL (بسته به کیت)
• Plate format: پلیت 96 چاله ای از قبل پوشش داده شده
• Sample types: سرم، پلاسما، سوپرناتانت کشت سلولی، هموژنات بافتی
• Sample volume: معمولاً ~50–100 μL در هر چاله
• Storage: در 2–8 °C، اجتناب از چرخه های متعدد انجماد و ذوب

پروتکل عملی (نحوه استفاده) کیت الایزا (ELISA) TNF-α موش

مراحل استاندارد اجرای کیت ELISA TNF-α موش به صورت گام به گام (Sandwich ELISA)

• ۱. آماده سازی: همه معرف ها را به دمای اتاق (RT) برسان. پلیت، بافرها، نمونه ها و استانداردها را مخلوط کن تا یکنواخت شوند.
• ۲. اضافه کردن استاندارد و نمونه: در هر چاله، 100 µL استاندارد یا نمونه بگذار. حداقل دو چاله برای هر استاندارد و نمونه تکرار انجام بده.
• ۳. انکوباسیون اولیه: پلیت را با نایلون یا Sealer پوشانده و برای ~60–90 دقیقه در RT یا طبق دستورالعمل کیت انکوبه کن.
• ۴. شست وشو: محلول هر چاله را خالی کن و با Wash Buffer (~300 µL) هر چاله را چند بار بشور (معمولاً 3–5 بار).
• ۵. اضافه کردن آنتی بادی تشخیصی: محلول آنتی بادی بیوتینه شده را به چاله ها اضافه کن (مثلاً 50–100 µL) و مجدداً انکوبه کن (~60 دقیقه).
• ۶. شست وشوی مجدد: شست وشو با Wash Buffer را مانند مرحله ۴ انجام بده تا آنتی بادی های غیرمتصل جدا شوند.
• ۷. افزودن استرپتاوید-HRP: محلول HRP-متصل را به چاله ها بزن و انکوبه کن (~30–60 دقیقه).
• ۸. شست وشوی نهایی: دوباره چند بار Wash Buffer را عبور بده تا غیرمتصل ها پاک شوند.
• ۹. افزودن سوبسترای TMB: سوبسترای HRP (TMB) را اضافه کن و 10–20 دقیقه در تاریکی انکوبه کن تا رنگ آبی تشکیل شود.
• ۱۰. افزودن Stop Solution: محلول توقف را افزوده تا رنگ آبی به زرد تغییر کند.
• ۱۱. خواندن پلیت: جذب نوری را در ~450 nm با میکروپلیت ریدر اندازه بگیر و با استفاده از منحنی استاندارد، مقدار TNF-α نمونه ها را محاسبه کن.

مزایا و نکات کلیدی کیت الایزا (ELISA) TNF-α موش

• حساسیت بالا برای تشخیص سیتوکین در سطح کم
• قابلیت مقایسه ای بین نمونه ها با استفاده از منحنی استاندارد
• قابل استفاده در انواع نمونه های زیستی (سرم، پلاسما، بافت)
• انتخاب کیت مناسب بسته به محدوده مورد مطالعه (High-Sensitivity برای مقادیر پایین) مهم است

استانداردها و کاربرد آزمایشگاهی کیت الایزا (ELISA) TNF-α موش

• این کیت برای تحقیقات پایه و پیش بالینی در زمینه بیماری های التهابی، ایمونولوژی و پاسخ های ایمنی کاربرد دارد.
• نتایج باید با اجرای کنترل های مثبت و منفی و داشتن منحنی استاندارد مطابق با روش ELISA تفسیر شوند.

Scientific Note: ELISA تکنیکی حساس است که با استفاده از آنتی بادی های اختصاصی و واکنش آنزیمی رنگی، امکان اندازه گیری دقیق مولکول های هدف مانند TNF-α را در نمونه های بیولوژیک فراهم می کند و از اصول استاندارد Immunoassay پیروی می کند.