MTT که مخفف Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide است، یک **رنگ زا و معرف بیوشیمیایی پرکاربرد** برای اندازه گیری زندگی و تکثیر سلولی در آزمایش های کشت سلولی است. این ترکیب در اصل یک **نمک تترازولیوم زرد رنگ** با فرمول شیمیایی C₁₈H₁₆BrN₅S است که توسط آنزیم های میتوکندریایی فعال در سلول های زنده به **فرمازان بی حلول بنفش** کاهش می یابد؛ شدت این رنگ بنفش پس از حل شدن بافر مناسب، با اندازه گیری جذب نوری (Absorbance) در حدود 570 nm قابل سنجش است و این اندازه گیری مستقیماً به **تعداد سلول های زنده و میزان متابولیسم آن ها** مرتبط است. از آزمون MTT برای **ارزیابی زنده مانی سلول، تست های سمیت (cytotoxicity)، سنجش تکثیر، و مقایسه اثر داروها یا ترکیبات بر سلول ها** استفاده می شود و به دلیل سادگی، حساسیت و قابلیت کمّی بودن، یکی از رایج ترین روش های استاندارد در تحقیقات سلولی و دارویی است.

کاربردهای اصلی تیازولیل بلو تترازولیوم بروماید

• اندازه گیری زندگی و زنده مانی سلول های کشت شده در شرایط آزمایشگاهی
• آزمون های اثر سیتوتوکسیک داروها، ترکیبات شیمیایی و نانومواد
• ارزیابی تکثیر سلول ها و پاسخ به محرک های رشد
• کنترل کیفیت و بررسی پاسخ های φبیولوژیک در بیوتکنولوژی و پژوهش های پیش بالینی

مشخصات فنی تیازولیل بلو تترازولیوم بروماید

• نام شیمیایی: 3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide
• فرمول مولکولی: C₁₈H₁₆BrN₅S
• وزن مولکولی: حدود 414.3 g/mol
• شکل فیزیکی: پودر زرد رنگ
• محلول پذیری: تا ~5 mg/ml در آب یا PBS، و بیشتر در الکل/اتانول :
• Wavelength: جذب نوری فرمالزان پس از حل شدن در حدود 570 nm اندازه گیری می شود
• Storage: در دمای 2–8 °C، دور از نور و رطوبت نگهداری شود
• Purity: عموماً ≥97–98% (HPLC)

نحوه استفاده استاندارد تیازولیل بلو تترازولیوم بروماید (MTT Assay Protocol)

در این آزمایش، باید مراحل زیر را طبق پروتکل مرجع و استاندارد انجام داد

• **تهیه محلول کاری MTT:** پودر MTT را در PBS یا محیط مناسب به **غلظت ~5 mg/mL** حل کن، مخلوط کن و **فیلتراسیون استریل** انجام بده. محافظت از نور الزامی است.
• **کشت سلول ها:** سلول های مورد نظر را در **پلیت 96-چاهک** با حجم مناسب کشت بده و به دمای **37 °C، 5% CO₂** انکوبه کن.
• **افزودن معرف:** مقدار معینی از محلول MTT را (مثلاً 10–20 µL در هر چاهک 100 µL نمونه) به چاهک ها اضافه کن و **برای ~2–4 ساعت** انکوبه کن تا فرمازان کریستال تشکیل شود.
• **حل کردن فرمازان:** پس از انکوباسیون، محیط را بردار و **محلول حل کننده اسید یا DMSO** اضافه کن تا کریستال های بنفش فرمازان حل شوند و یک محلول یکنواخت رنگی شکل گیرد.
• **اندازه گیری جذب نوری:** با استفاده از **Microplate reader**، جذب را در ~570 nm بخوان تا مقدار فورمازان و زنده مانی سلولی سنجیده شود.

مزایای کلیدی تیازولیل بلو تترازولیوم بروماید

• سنجش کمّی و قابل تکرار از زنده مانی سلولی
• قابلیت استفاده در **پلیت های چندچاهکی** و روش های HTS
• بیشترین کاربرد در **تحقیقات پیش بالینی و سم شناسی**

نکات مهم در استفاده و خرید تیازولیل بلو تترازولیوم بروماید

1. MTT باید **در شرایط استریل و محافظت از نور** نگهداری شود تا از اکسیداسیون و تخریب جلوگیری گردد.
2. غلظت، زمان انکوباسیون و تعداد سلول باید پیش از کار **برای هر نوع خط سلولی بهینه شود**.
3. محلول های کشت حاوی **فنول قرمز یا ترکیبات کاهنده** می توانند با اندازه گیری تداخل کنند.
4. فرمازان تولیدشده باید **کاملاً حل شود** تا اندازه گیری دقیق جذب ممکن گردد.

کاربردهای عملی تیازولیل بلو تترازولیوم بروماید در آزمایشگاه

• در آزمایش های **سیتوتوکسیسیته داروها** برای تعیین IC50
• در مطالعات **تکثیر سلولی** و پاسخ به محرک ها
• در ارزیابی عملکرد **مواد بیولوژیک، نانوپزشکی و ترکیبات درمانی**

Scientific Note: اساس MTT assay، **کاهش MTT به فرمازان بنفش توسط دهیدروژنازهای میتوکندریایی** است که نشان دهنده متابولیسم فعال و زنده مانی سلول هاست؛ این روش اولین بار توسط Mosmann گزارش شد و تاکنون یکی از استانداردهای سنجش زنده مانی در تحقیقات زیست پزشکی است.