Trypsin-EDTA 0.25% یک محلول آنزیمی آماده برای دیسوسی کردن سلول های چسبیده (adherent cells) در کشت سلولی است که به طور گسترده در آزمایشگاه های زیست پزشکی، بیوتکنولوژی و تحقیقات سلولی استفاده می شود. این محصول شامل تریپسین به عنوان یک پروتئاز سریِن با منشأ پانکراس خوک است که اتصال های پروتئینی بین سلول و سطح بستر را می شکند و به همراه EDTA (یک عامل شلاته کننده یون های Ca²⁺ و Mg²⁺)، دیتاچمنت کارآمد سلول ها را فراهم می کند و به تهیه تعلیق تک سلولی جهت پاساژ دادن (passaging)، شمارش سلولی، تحلیل جریان سنجی (flow cytometry)، تفکیک بافت های اولیه و آماده سازی تک سلول برای آزمایش های بعدی کمک می کند. این ترکیب در فرم استاندارد ۰.۲۵٪ به طور معمول برای سلول های پستانداران معمولی استفاده می شود و نسبت به غلظت های پایین تر (مثلاً ۰.۰۵٪) قدرت بیشتری در جدا کردن سلول ها دارد، اما باید با کنترل زمان و دما به کار رود تا آسیب به سلول ها به حداقل برسد.

کاربردهای پژوهشی تریپسین-EDTA 0.25٪

• کشت و پاساژ سلول های چسبیده (مانند خطوط سلولی انسانی، موش و رت)
• استخراج تک سلول های سالم جهت شمارش، flow cytometry و RNA sequencing
• دیسوسی کردن بافت ها برای تهیه سوسپانسیون تک سلولی
• آماده سازی سلول ها برای آزمایش های بیوشیمی، فارماکولوژی و سم شناسی

مشخصات فنی تریپسین-EDTA 0.25٪

• Concentration: 0.25% تریپسین در Hanks’ Balanced Salt Solution بدون Ca²⁺ و Mg²⁺
• EDTA: 1 mM عامل شلاته کننده برای افزایش جداسازی سلول ها
• pH: ~7.2–7.4
• Format: محلول استریل آماده استفاده
• Sterility: فیلتراسیون استریل (استفاده مستقیم در کشت سلولی)
• Source: Trypsin مشتق از پانکراس خوک
• Storage: منجمد (≈ -20 °C) یا تا 2–8 °C پس از یخ زدایی؛ از چرخه های مکرر انجماد و ذوب اجتناب شود.

نحوه آماده سازی و استفاده از تریپسین-EDTA 0.25٪ (Cell Dissociation Protocol)

• رساندن محلول به دمای 2–8 °C و به آرامی مخلوط کردن قبل از استفاده
• حذف مدیا از ظرف کشت و شست وشوی لایه ی سلولی با PBS بدون Ca²⁺/Mg²⁺
• افزودن Trypsin-EDTA 0.25% تا پوشش کامل سطح سلول
• انکوباسیون در 37 °C برای ~1–5 دقیقه تا سلول ها شروع به جدا شدن کنند (زمان وابسته به نوع سلول)
• مشاهده ی جدا شدن سلول ها زیر میکروسکوپ؛ افزودن مدیا حاوی سرم برای غیرفعال سازی آنزیم
• پایان کار: سوسپانسیون سلولی را با pipette ملایم دهید و برای آزمایش یا پاساژ بعدی استفاده کنید.

مزایای کلیدی تریپسین-EDTA 0.25٪

• کارایی بالا در جداسازی سلول های چسبیده
• ترکیب EDTA با تریپسین برای افزایش اثر آنزیمی
• مناسب برای کاربردهای سلولی متعدد از کشت تا تحلیل تک سلولی
• فرم استریل آماده که نیاز به آماده سازی زیاد ندارد

نکات مهم برای خرید و استفاده از تریپسین-EDTA 0.25٪

1. زمان انکوباسیون زیاد یا دما بالاتر از حد توصیه شده می تواند منجر به آسیب و مرگ سلولی شود؛ زمان و دما را مطابق نوع سلول بهینه کنید.
2. برای سلول های حساس و با چسبندگی پایین، ممکن است غلظت کمتر (مثلاً 0.05%) مناسب تر باشد.
3. پس از درمان با تریپسین-EDTA، اضافه کردن مدیا حاوی سرم ضروری است تا فعالیت آنزیم قطع شود.
4. از شست وشوی کامل با PBS بدون Ca²⁺/Mg²⁺ قبل از افزودن تریپسین مطمئن شوید تا کارایی آنزیم بهینه باشد.
5. این محصول فقط برای تحقیقات آزمایشگاهی است و برای استفاده انسانی یا تشخیصی تأیید نشده است.

استانداردها و کیفیت تریپسین-EDTA 0.25٪

• Cell Culture Tested – تایید مناسب برای کشت سلولی
• مناسب برای تهیه Single Cell Suspension جهت روش هایی مثل Flow Cytometry

Scientific Note: تریپسین یک serine protease است که پیوندهای پپتیدی Lys و Arg را هیدرولیز می کند، و EDTA با جدا کردن یون های Ca²⁺ و Mg²⁺، دسترسی آنزیم به محل اتصال سلول ها را افزایش می دهد و جداسازی سلولی را تسهیل می کند؛ بنابراین این بافر برای جداسازی مؤثر لایه های سلولی چسبیده در بیولوژی سلولی و بیوتکنولوژی کاربرد دارد.