Anti-GAPDH antibody یک آنتی بادی اولیه است که به طور اختصاصی پروتئین Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase (GAPDH) را تشخیص می دهد، یک آنزیم خانه داری (housekeeping) که در مسیر گلیکولیز نقش دارد و در بسیاری از سلول های پستانداران به طور پایدار بیان می شود. آنتی بادی های ضد GAPDH با میزبان موش (Mouse) منتشر می شوند و از آن ها عمدتاً برای کنترل بارگذاری (loading control) روی وسترن بلات، الایزا، ایمنوهیستوشیمی و دیگر آزمایش های ایمونوشیمی استفاده می شود، زیرا GAPDH در اکثر بافت ها و خطوط سلولی به صورت پایدار و با سطح قابل تشخیص موجود است، که این آنتی بادی را به ابزاری استاندارد در پروتکل های تحلیل پروتئینی تبدیل می کند.

کاربردهای اصلی آنتی بادی ضد GAPDH میزبان موش

• Western Blot (WB) — به عنوان کنترل بارگذاری برای تأیید تساوی بار پروتئینی در نمونه ها
• ELISA — اندازه گیری کمّی پروتئین GAPDH در نمونه های سلولی/بافت
• Immunohistochemistry (IHC) — بررسی توزیع و بیان GAPDH در بخش های بافتی
• Immunocytochemistry (ICC/IF) — تشخیص GAPDH در سلول های کشت شده
• Flow Cytometry (FC) — سنجش سطح پروتئین در جمعیت سلولی

مشخصات فنی آنتی بادی ضد GAPDH میزبان موش

• Target: Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase (GAPDH)
• Host species: Mouse
• Antibody type: عموماً Monoclonal IgG (Affinity-purified)
• Formulation: محلول در PBS با افزودنی هایی مثل BSA یا Azide
• Reactivity: Human, Mouse, Rat و اغلب گونه های پستاندار مشابه
• Predicted MW: ~36 kDa (زیر واحد گلیکولیز) در شرایط کاهش دهنده
• Storage: ذخیره سازی در 2–8 °C برای کوتاه مدت یا در -20 °C برای بلندمدت با علی کوات های کوچک

نحوه استفاده و پروتکل عملی آنتی بادی ضد GAPDH میزبان موش

• Western Blot:
• پروتئین ها را روی ژل SDS-PAGE جدا کن و به غشاء منتقل کن.
• بعد از بلاک کردن غشاء، آنتی بادی ضد GAPDH را در رقیق مناسب (مثلاً 1:1000 تا 1:10000) در بافر TBST + BSA تهیه کن.
• غشاء را برای 1–2 ساعت در دمای اتاق یا O/N در 4 °C انکوبه کن.
• پس از شست وشو، آنتی بادی ثانویه مناسب (مثلاً Goat anti-Mouse HRP) را اضافه کن و بعد از شست وشوی نهایی، با سوبسترای مناسب سیگنال را توسعه بده.
• ELISA:
• بعد از بسته و شست وشوی چاهک، آنتی بادی را در رقت توصیه شده تولیدکننده قرار بده و انکوبه کن.
• پس از شست وشوی چاهک ها، سوبسترای مناسب را اضافه کن و جذب نوری در میکروپلیت ریدر بخوان.
• Immunohistochemistry / Immunocytochemistry:
• نمونه ها را فیکس کن، بلاک کن و آنتی بادی اولیه را در رقت مناسب روی نمونه ها بزن.
• پس از انکوباسیون و شست وشو، آنتی بادی ثانویه مناسب (مثلاً ضد-موش با کنژوگه HRP یا فلورسانس) اضافه کن.
• سپس سوبسترای مناسب یا رنگ ثانویه را اعمال کن و با میکروسکوپ مشاهده کن.

مزایای کلیدی آنتی بادی ضد GAPDH میزبان موش

• کنترل بارگذاری قابل اعتماد به دلیل بیان پایدار GAPDH در بسیاری از سلول ها
• سازگار با چندین روش ایمونودتکشن شامل WB، ELISA، IHC و IF
• غلظت و رقت ها قابل بهینه سازی برای حساسیت مورد نیاز

نکات مهم برای خرید و استفاده از آنتی بادی ضد GAPDH میزبان موش

1. برای جلوگیری از کاهش فعالیت و از دست دادن پایداری، از چرخه های متعدد انجماد و ذوب جلوگیری کن.
2. بسته به نوع آزمایش، غلظت و زمان انکوباسیون را بهینه کن — تولیدکننده معمولاً رنج پیشنهادی را در دیتا شیت ارائه می دهد.
3. برای تجزیه وتحلیل های عددی (Quantitative) بهتر است از کنترل های داخلی و استانداردهای مناسب استفاده شود.
4. از آنتی بادی ثانویه ای استفاده کن که به Host species این آنتی بادی (Mouse) واکنش نشان دهد (مثلاً Goat anti-Mouse). این انتخاب کمک می کند تا سیگنال پس زمینه کاهش یابد و تشخیص بهتر انجام شود.

استانداردها و کاربرد آزمایشگاهی آنتی بادی ضد GAPDH میزبان موش

• این آنتی بادی معمولاً به عنوان loading control در Western Blot برای تأیید یکنواخت بودن بار پروتئینی مورد استفاده قرار می گیرد.
• قابلیت استفاده در ELISA، Immunocytochemistry و Immunohistochemistry نیز دارد و در بسیاری از لابراتورها استاندارد است.

Scientific Note: GAPDH به عنوان یک housekeeping protein، به دلیل بیان پایدار و گسترده در اکثر سلول ها، یک شاخص استاندارد برای کنترل بارگذاری در تکنیک های پروتئین شناسی محسوب می شود و آنتی بادی های موش علیه آن اغلب برای مقایسه های بین نمونه ای ضروری هستند.