HRP-labeled Anti-Rabbit IgG Secondary Antibody یک آنتی بادی ثانویه پلیمری یا پولی کلونال است که به طور خاص به IgG حاصل از خرگوش (Rabbit IgG) متصل می شود و با نشاندار شدن به آنزیم Horse Radish Peroxidase (HRP) امکان تشخیص رنگی، شیمی لومینسانس یا کروموژنیک را در آزمایش های ایمونوشیمی، ای ال ای سا، وسترن بلات و ایمنی شناسی فراهم می کند. در این محصول، آنتی بادی اولیه که علیه آنتی ژن خاص تولید شده است (مثلاً پروتئین هدف)، از خرگوش تهیه می شود و سپس برای دیده شدن سیگنال با آنتی بادی ثانویه HRP-نشاندار واکنش می دهد تا سیگنال قوی و قابل اندازه گیری در دستگاه های استاندارد آزمایشگاهی ایجاد کند.

کاربردهای رایج آنتی بادی ثانویه ضد Rabbit IgG نشاندار با HRP

• تشخیص پروتئین هدف در Western Blot (WB) از طریق سیگنال رنگی یا شیمی لومینسانس
• تحلیل های ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) برای اندازه گیری کمّی آنتی ژن
• کاربرد در Immunohistochemistry (IHC) برای مشاهده بیان پروتئین در بافت های مختلف
• کاربرد در Immunocytochemistry (ICC) جهت بررسی بیان پروتئین در سلول های کشت شده

مشخصات فنی آنتی بادی ثانویه ضد Rabbit IgG نشاندار با HRP

• Target: Rabbit IgG (Heavy + Light chains)
• Host species: Goat (معمولاً)، پولی کلونال
• Conjugate: Horse Radish Peroxidase (HRP)
• Purification: Affinity purified برای افزایش اختصاصیت
• Formulation: محلول در PBS با افزودنی های محافظ (مثلاً گلیسرول و BSA)
• Storage: ذخیره در -20 °C با محافظت از نور یا به صورت گلیسرولیک در 4 °C بسته به برند
• Applications: WB, ELISA, IHC, ICC
• Reactivity: IgG از خرگوش؛ حداقل تداخل با IgG از دیگر گونه ها

نحوه استفاده و پروتکل عملی آنتی بادی ثانویه ضد Rabbit IgG نشاندار با HRP

• **آماده سازی محلول ثانویه:** در اغلب روش ها آنتی بادی را در یک **بافر مناسب (مثلاً PBS/TBST + 1–5% BSA)** رقیق کن (غلظت های معمول در WB: 1:1,000–1:10,000؛ در ELISA: 1:5,000–1:100,000 بسته به حساسیت آزمایش و توصیه سازنده).
• **وسترن بلات:** پس از بستن اولیه (Primary) و شست وشوی غشاء، آنتی بادی HRP-نشاندار را اضافه کن و برای **۱ ساعت در دمای اتاق** یا **۴ °C به صورت شبانه** انکوبه کن. سپس شست وشو بده و با استفاده از سوبسترای HRP جهت تولید سیگنال (کروموژنیک، شیمی لومینسانس) ببین.
• **ELISA:** پس از مراحل بستن اولیه، آنتی بادی ثانویه را به چاهک اضافه کن و پس از انکوباسیون، سوبسترای HRP (مانند TMB) را اضافه کن تا رنگ ایجاد شود و جذب نوری در دستگاه میکروپلیت ریدر بخوان.
• **IHC / ICC:** بعد از بستن و شست وشوی بافت/سلول، آنتی بادی ثانویه HRP را انکوبه کن، سپس سوبسترای مناسب (مثلاً DAB) را اضافه کن تا رنگ قهوه ای در محل های باند پروتئین هدف مشاهده شود.

مزایای کلیدی آنتی بادی ثانویه ضد Rabbit IgG نشاندار با HRP

• تقویت سیگنال نسبت به آنتی بادی های مستقیم
• قابلیت استفاده در تکنیک های متعدد (WB, ELISA, IHC, ICC)
• پلی کلونال بودن باعث ارتباط بیشتر با ایزوتایپ های مختلف IgG می شود
• HRP یک آنزیم قوی برای تولید سیگنالهای کروموژنیک یا شیمی لومینسانس است

نکات مهم برای خرید و استفاده از آنتی بادی ثانویه ضد Rabbit IgG نشاندار با HRP

1. آنتی بادی باید نسبت به **گونه اولیه (Rabbit)** مناسب باشد — اگر Primary از خرگوش است، حتماً Anti-Rabbit انتخاب کن.
2. غلظت و رقت ها باید برای هر آزمایش **بهینه شود** و مقادیر پیشنهادی سازنده را به عنوان نقطه شروع قرار بده.
3. در روش هایی که **شیمی لومینسانس** استفاده می شود، سوبسترای مناسب HRP (مثلاً ECL) انتخاب کن تا بالاترین حساسیت را بدست آوری.
4. ذخیره سازی مناسب (محافظت از نور، جلوگیری از چرخه های مکرر انجماد و ذوب) برای حفظ فعالیت آنزیم HRP ضروری است.

استانداردها و کاربرد آزمایشگاهی آنتی بادی ثانویه ضد Rabbit IgG نشاندار با HRP

• قابل استفاده برای Western blotting با سوبسترای HRP
• کاربرد در ELISA برای اندازه گیری کمی آنتی ژن
• استفاده در Immunohistochemistry (IHC) جهت مشاهده بیان پروتئین در بافت با سوبسترای کروموژنیک مانند DAB
• استفاده در Immunocytochemistry (ICC) برای بررسی پروتئین در سلول ها

Scientific Note: Secondary antibodies conjugated to HRP are widely used in immunodetection because HRP catalyzes chromogenic or chemiluminescent reactions, producing strong and detectable signals proportional to the amount of bound primary antibody. انتخاب آنتی بادی ثانویه مناسب برای Host و Target درست، کلید موفقیت در آزمایش های ایمونولوژیک است.